人原代前脂肪原代細胞

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：人

組織來源：脂肪脂肪

生長特性：貼壁生長

產品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產品貨期：3-4周

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制：僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：:人前脂肪細胞采用膠原酶消化法制備而來，人前脂肪細胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏松結締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內皮功能、纖溶活動及炎癥反應，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內分泌系統(tǒng)。脂肪組織在體內含有兩種主要的細胞：一種是在胞漿內積聚脂滴的成熟脂肪細胞；另一種是雖未在胞漿內積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞。前脂肪細胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細胞呈圓形，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化前體細胞，與肥胖有著非常密切的關系。前脂肪細胞是一種類成纖維細胞，在演變的過程中不斷吸收脂質，最終成為成熟的脂肪細胞。前脂肪細胞對外界機械損傷的抵抗力較強，可望成為軟組織缺損的有益填充物。

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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