人參源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒原理簡述如下:

1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時,報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的*技術(shù)平臺。

2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。

3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系

SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

A549, 人肺癌細(xì)胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫shan醇耐藥細(xì)胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細(xì)胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞

WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細(xì)胞

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細(xì)胞癌

Hela, 人宮頸癌細(xì)胞系

HNE2, 人鼻咽癌細(xì)胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細(xì)胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細(xì)胞

HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系

Caki-1, 人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞

Ishikawa, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系

ACHN, 人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞

JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系

BPH-1, 人前列腺增生細(xì)胞

RL95-2, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系

Ca Ski, 人宮頸癌細(xì)胞

MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細(xì)胞系

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞